Głównym i tytułowym bohaterem dramatu Szekspira jest Makbet. Dowodzi wojskiem w wojnie szkocko-norweskiej. Jest wasalem i kuzynem króla Dunkana. Mieszka na zamku w Inverness. Jego żona to bezwzględna Lady Makbet. Makbet to postać dynamiczna, która zmienia się pod wpływem wydarzeń, przedstawionych w dramacie. Początkowo jest bohaterem zdecydowanie pozytywnym, wyróżnia się męstwem i walecznością. Dochowuje wierności królowi Dunkanowi, podejmuje szybkie i trafne decyzje, dzięki czemu prowadzi Szkotów do zwycięstwa. Wszystko zmienia się, gdy trzy wiedźmy przepowiadają Makbetowi, że zostanie królem Szkocji. Budzą w ten sposób nadmierną ambicję bohatera. Makbet, podjudzany przez żonę, sprzeniewierza się wszystkim wyznawanym przez siebie zasadom. Morduje Dunkana, mimo że uważa go za bardzo dobrego króla. Dopuszcza się też zabicia swojego przyjaciela Banka, ponieważ ten słyszał przepowiednię i według niej ma zapoczątkować ród królewski. Pierwsze morderstwo rozpoczyna szereg zbrodni. Makbet zleca nawet zabicie żony i dziecka Makdufa, wiernego Dunkanowi. Bohater nie jest tak dobrym władcą, jak jego poprzednik, można uznać go za tyrana. Makbet ma zbyt słabą psychikę, aby udźwignąć ciężar zbrodni. Gdy objawia mu się duch Banka, dopadają go wyrzuty sumienia. Makbet zyskuje upragnioną władzę, ale nie może się nią cieszyć. Traci spokój ducha, przyjaciół, żonę, a w końcu życie. Przegrywa pojedynek z Makdufem. Śmierć uwalnia go od obłędu i kończy łańcuch zbrodni. Nic nie może usprawiedliwić czynów Makbeta. Przepowiednia wiedźm nie jest mitycznym fatum, bohater ma wolną wolę i sam decyduje się na królobójstwo.
Ważną rolę w utworze odgrywa Lady Makbet. Żona głównego bohatera również przechodzi przemianę. Na początku dramatu jest bezwzględną, opanowaną kobietą. Gdy Makbet ma wątpliwości, dotyczące zabicia króla Dunkana, nakłania go do tego, stosując manipulację. Uznaje męża za tchórza, aby obudzić w nim ambicję. Lady Makbet zachowuje zimną krew i po dokonaniu zabójstwa króla zaciera ślady, aby oskarżenie padło na strażników, a następnie na synów Dunkana. Pozostaje opanowana również podczas uczty, gdy jej mąż prawie przyznaje się do zbrodni. Lady Makbet stanowi zaprzeczenie wszelkich stereotypów na temat kobiecości. Nudzi ją spokojne życie, za wszelką cenę pragnie władzy i dominacji. Wykorzystuje swoją silną wolę i mocny charakter w najgorszy możliwy sposób. Ostatecznie jednak Lady Makbet okazuje się słabsza, niż jej się wydawało. Kobieta wpada w obłęd, wciąż widzi krew na swoich rękach. Utrata zmysłów doprowadza ją do samobójczej śmierci.
Na początku dramatu, najbliższym przyjacielem Makbeta jest Banko. Również należy do dowódców wojsk szkockich. Jest walecznym, szlachetnym rycerzem, w dużej części przyczynia się do wygranej Szkocji w wojnie. Banko realistycznie podchodzi do życia. Nie wierzy bezkrytycznie w słowa wiedźm, chociaż przepowiadają mu, że zapoczątkuje ród królewski. Banko rzeczywiście uważany jest za założyciela rodu Stuartów – królów Anglii. Udaje mu się zostawić po sobie następcę, jego syn Fleance uchodzi żywy z zasadzki. Próbuje przekonać Makbeta, że ich widzenie mogło być wynikiem halucynacji po zjedzeniu trujących roślin. Jest wiernym przyjacielem, nie mówi królowi Dunkanowi o przepowiedni. Pozostaje neutralny podczas konfliktu Makbeta z lordami, którzy podejrzewają nowego króla Szkocji o spisek. Banko ginie w napaści, zorganizowanej przez głównego bohatera. Jego duch pojawia się podczas uczty, co przeraża Makbeta.
Król Dunkan to sprawiedliwy i dobry władca Szkocji. Ze względu na podeszły wiek, nie może samodzielnie dowodzić wojskiem. Posiada jednak szacunek swoich wasali, ze względu na swoje dokonania z młodości. Każe zdrajców ojczyzny, ale też nagradza bohaterów. Ginie, zamordowany we śnie przez Makbeta.
Prawowitym następcą szkockiego tronu jest Malkolm, pierworodny syn Dunkana. Gdy zostaje niesłusznie oskarżony o zabójstwo swojego ojca, musi ukryć się w Anglii. Lordowie nakłaniają go, aby wrócił do ojczyzny i odebrał tron Makbetowi. Malkolmowi brakuje pewności siebie, początkowo nie czuje się gotowy na przejęcie władzy. W końcu wyrusza jednak do Szkocji na czele angielskiej armii.
Młodszym bratem Malkolma jest Donalbein. Również zostaje oskarżony o zamordowanie Dunkana. Ukrywa się w Irlandii, ale dołącza do Malkolma maszerującego do Szkocji.
Jednym z najbardziej podejrzliwych bohaterów jest Makduf. Znajduje ciało króla Dunkana i nie wierzy, że zabili go strażnicy lub synowie. Wyrusza do Anglii, aby nakłonić Malkolma do odebrania tronu Makbetowi. Przeżywa osobistą tragedię, pod jego nieobecność Makbet każe zamordować żonę i syna Makdufa. Udaje mu się zemścić na Makbecie. Jako niezrodzony z kobiety, ponieważ został wyjęty z łona matki po jej śmierci, jest w stanie pokonać głównego bohatera.
Malkolmowi pomaga Siward, generał angielskiej armii. Do walki dołącza również jego syn – Młody Siward. Ginie w walce z Makbetem, ponosząc godną śmierć na polu bitwy.
Do zaistniałych tragedii przyczyniają się trzy czarownice. Zdają sobie sprawę z chorobliwej ambicji Makbeta, dlatego przepowiadają mu objęcie szkockiego tronu. Posiadają nadprzyrodzone zdolności, chociaż Szekspir przedstawił je w karykaturalny sposób. Nie wiadomo, czy rzeczywiście znają ludzką przyszłość, czy jedynie bawią się śmiertelnikami.